什么是南方污点(Southern Blot)？

Southern blot是一种用于检测样本中DNA含量的技术，它以edwinsouthern命名，英国生物学家，他在20世纪70年代开创了这项技术。Southern印迹分析使用凝胶电泳分离样本中的DNA片段，然后使用探针检测感兴趣的DNA序列。Southern blot技术最简单的用法是使用探针来识别感兴趣的DNA序列，或者它必须被分离出来用于其他用途。Southern blotting首先从细胞中提取DNA样本，然后用限制性酶将核酸切割成大小不等的片段，然后通过变性琼脂糖凝胶电泳将这些片段分为单链同时也按大小分开。Southern blot是一种用于检测样本中DNA含量的技术。Southern杂交的下一步是将分离的DNA片段转移到尼龙或硝化纤维上，它使碎片保持不动，然后用单链DNA的杂交探针培育薄片。探针的序列被设计成能与实验试图检测的DNA序列相结合。如果样本中存在探针片段，则每个探针片段都将与其互补的DNA序列相结合形成一段双链DNA。探针用放射性同位素或酶标记。在同一个实验中可以使用多个探针。培养完成后，Southern印迹过程的最后一步是揭示探针与互补DNA结合的位置如果探针被标记有放射性同位素，这是通过使用x射线来检测探针与样本DNA片段杂交的点来完成的。当使用酶时，将进行进一步的培养。用于此目的的酶是指当它与底物反应时产生有色产物的酶，因此，Southern杂交是通过添加底物来揭示探针DNA与样本DNA结合的位置来完成的。Southern印迹法有多种用途。Southern印迹法最简单的用途是使用探针来识别感兴趣的DNA序列，或者必须分离出用于其他用途的DNA序列。Southern印迹法也用于确定一个特定序列在一个样本中有多少个拷贝。这是可能的，因为当一个序列有更多的拷贝并与探针结合时，会产生更强的放射性或酶信号。这项技术的另一个常见用途是对细菌和其他微生物进行基因操作。在这种情况下细菌DNA探针检测外源DNA是否成功导入细菌，Southern印迹法也是限制性片段长度多态性技术的基础。